Главная


Детальная информация купить спирт в москве у нас на сайте.

Комплементзависимая цитотоксичность. Источники возможных ошибок и их предотвращение

Клеточные суспензии

Отрицательный контроль (АВ-сыворотка) не должен давать более 10% .неживых клеток, поскольку при более высоких значениях оценка результатов становится затруднительной. Большие количества неживых клеток в контроле встречаются в образцах крови, хранившихся более суток.

Контаминация гранулоцитами. У пациентов с «левым сдвигом», особенно у потенциальных доноров почки, суспензия лимфоцитов может содержать значительную примесь гранулоцитов, которые во всех случаях разрушаются комплементом морской свинки, что весьма затрудняет оценку результатов. Незрелые гранулоциты имеют такую же плотность, как лимфоциты, поэтому они не удаляются при отмывке. В таких случаях можно рекомендовать адсорбцию на глазной вате, к волокнам которой прикрепляются гранулоциты. Для этого в шприц (20 мл), неплотно заполненный глазной ватой, наносят 10 мл дефибринированной крови или надосадочной фракции после осаждения декстраном, инкубируют 30 минут при 37 °С в термостате, затем промывают шприц из пипетки 10 мл раствора Хэнкса, вату осторожно отжимают.

Контаминация тромбоцитами. Тромбоциты удаляют из гепаринизированной крови двукратным отмыванием при 100 g. Это необходимо, поскольку тромбоциты как носители HLA-A, HLA-B и HLA-C локусов адсорбируют анти-HLA-иммуноглобулины и могут вызывать ложноотрицательные реакции.

Типирующие сыворотки

«Проросшие» сыворотки могут вызывать ложноположительные реакции. В качестве консерванта рекомендуется азид натрия в концентрации 0,1 %. Анти-НLA-сыворотки необходимо проверять на наличие слабых перекрестно реагирующих HLA-антител и антиэритроцитарных антител (особенно анти-А и анти-Leа) перед их использованием.

Комплемент

Способы проверки качества комплемента см. в разделе "Реакция лимфоцитолиза"

Прочие реагенты

Вазелиновое масло, используемое для предотвращения высыхания жидкости в тест-камерах, не должно обладать токсичностью и способностью ингибировать комплемент. Раствор формальдегида (для фиксации) доводят карбонатом натрия до рН 7,2, поскольку при рН ниже 7,0 невозможно проводить различие между живыми и мертвыми клетками.