Главная


Найдите здесь как купить мото косу sevat.com.ua.

Агглютинация латекса. Постановка опыта на примере выявления HBs-антигена

Материалы и оборудование. Для работы необходимы: полистироловый латекс (Випа, ГДР), стеклянные пластины, пипетки, анти-НВs-сыворотка (например, анти-НВs-γ-глобулиновая фракция (Serum und Impfstoffwerk, Дессау, ГДР), насыщенный раствор (NH4)S04, глициновый буфер, диализная лента.

Состав буфера:

2 М глицин 150,14 г/л —467 мл
1 М NaOH 40,0 г/л — 100 мл
Смешать буфер в соотношении 1 + 1 с 0,15 М NaCl.

Получение анти-НВs-γ-глобулиновой фракции

К 10 мл антисыворотки (независимо от титра) добавляют по каплям при постоянном помешивании 6 мл насыщенного раствора (NH4)2OH. Осадок собирают центрифугированием и растворяют в 5 мл воды. Раствор диализируют до полного удаления сульфата аммония, доводят концентрацию белка в препарате до 20 г/л. Дальнейшая очистка, например хроматографическая, возможна, но нами не применялась.

Получение HB s-АГ-латекса

К 1 мл 2% анти-НВs-γ-глобулиновой фракции приливают 10 мл 1% суспензии латекса в глицин-NaCl буфере с рН 8,8; инкубируют 12 часов при 20°С, а затем еще 12 чаов при 4°С. Образующийся осадок тщательно суспендируют. Суспензию разводят глицин-NaCl буфером и при помощи латекс-позитивной контрольной сыворотки устанавливают оптимальные условия агглютинации. Как правило, наилучшее разведение суспензии составляет 1 + 4.

Постановка реакции

1 каплю латексного реагента смешивают с 1 каплей исследуемой сыворотки на стеклянной пластине я покачивают ее в течение 2 минут. Оценку результатов проводят через 10—15 минут в косом, падающим снизу свете на темном фоне. Более поздняя агглютинация рассматривается как неспецифическая. Сыворотка должна быть свежей без примеси клеток. Сыворотки с высоким содержанием липидов и желчных пигментов, а также ВИЭФ-позитивные сыворотки необходимо перед реакцией разводить.