Главная


производство сухих молочных продуктов

Оценка метода

Современное состояние знаний о механизме антителообразования в значительной степени основывается на данных, полученных при исследовании первичной стимуляции культур клеток. Для оценки современного и будущего значения, а также преимуществ данной системы следует учитывать следующие моменты:

1. Процесс антителообразования во всей его сложности вычленяется из организма животных и делается доступным для прямых наблюдений.

2. Все стадии процесса происходят в известных постоянных, воспроизводимых и направленно изменяемых условиях.

3. Становится возможным анализ роли различных типов клеток, принимающих участие в антителообразовании — Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов, макрофагов путем их совместного или раздельного культивирования.

4. Вещества, секретируемые в ходе кооперативного взаимодействия клеток, например, медиаторы регуляции, могут быть выделены и идентифицированы, а механизм их действия детально изучен.

5. Механизм антителообразования в организме человека доступен изучению почти исключительно методом культивирования клеток.

6. Применение системы культивирования клеток человека дает возможность выделять клетки, стимулированные определенными антигенами, и затем получать моноклональные антитела человеческого происхождения.

7. В будущем, вероятно, смогут быть выявлены причины дефектов гуморального иммунитета, сопровождающиеся патологическими проявлениями, станет возможным корригировать отклонения в образовании антител адекватными терапевтическими мерами.

Следует помнить, что изучение первичного иммунного ответа в культуре клеток позволяет получать данные, которые можно переносить на живой организм с известными оговорками. Все существующие системы культивирования используют клеточные суспензии, содержащие продукты отмирания клеток, которые могут оказывать искажающее влияние на рост культуры. Высвобождающиеся в процессе жизнедеятельности биологически активные вещества могут изменять потребности некоторых типов клеток в питательных веществах.

Ограниченность общих выводов, которые обычно делают при работе с культурой клеток, связана с тем, что удается выращивать in vitro клетки небольшого числа видов животных, причем далеко не все антигены в этих условиях индуцируют иммунный ответ. Между индукцией и образованием антител в культуре протекает много качественно различных стадий: захват антигена, «узнавание» антигена, переваривание и презентация антигена, кооперативное взаимодействие клеток, деление и дифференциация клеток, биосинтез белка. Каждая из этих стадий требует своих особых, оптимальных условий среды и, кроме того, весьма чувствительна к различным неблагоприятным воздействиям. Этим объясняется ют факт, что многочисленным исследовательским группам не удалось включить метод культивирования АОК в свой арсенал, и зачастую даже при успешном культивировании не удалось добиться эффективной продукции антител.

По нашим собственным наблюдениям, антителообразования не наблюдается в приблизительно 10% экспериментов. При постановке параллельных серий экспериментов количество антителообразующих клеток в разных чашках дает разброс 23%, причем для метода локального гемолиза разброс не превышает 15%. Неодновременная постановка опытов приводит к еще большему разбросу результатов (от 600 до 4000 АОК в различных чашках). Максимум антителообразования в культуре обычно наблюдается к 4-му дню, причем в ряде случаев он к этому времени уже прошел, в других — еще не наступил. В последнее время все чаще используют 2-меркаптоэтанол в качестве обязательного компонента культуральных сред. Это вещество благоприятно влияет на выживаемость клеток и заметно повышает количество АОК.

Функциональная активность системы культивирования зависит от типа используемой сыворотки. Почти во всех без исключения случаях используют сыворотку плода коровы. Не все компоненты этой сыворотки, однако, пригодны в одинаковой мере. Неблагоприятное воздействие некоторых составляющих сыворотки может быть нейтрализовано добавлением 2-меркаптоэтанола. Несмотря на высокую стоимость, подверженность искажениям и ограниченность возможных областей применения, методы исследования первичного иммунного ответа in vitro могут стать незаменимым средством анализа механизмов гуморального иммунного ответа.