Главная


Купить в Лыткарино известняковый щебень для изготовления асфальта.

Клетки и молекулы, осуществляющие специфичную иммунологическую супрессию

Более строгая и информативная техника Т-клеточных клонов (без использования гибридизации) была с успехом применена в исследовании Т-супрессорного клона (Ly1-2+) «CI.LY23.4», экспрессирующего на поверхности рецепторы гликофорина эритроцитов барана. Анализ свойств этого Т-клона показал, что его клетки во многом сходны с образующими антитела В-клетками. Оба типа клеток имеют примерно равное число поверхностных рецепторов, взаимодействующих с антигеном в отсутствие продуктов МНС, и отвечают на сигналы индукторных клеток секрецией антигенсвязывающих белков. Клетки клона CI.LY23.4 секретируют белки с молекулярной массой 70 кДа, которые связываются с антигеном и осуществляют супрессию. Пикограммовые количества очищенного антигенсвязывающего белка специфично подавляют уже начавшийся иммунный ответ на антиген.

Для изучения структурной основы этой активности была использована деградация очищенных Т-супрессорных молекул (Тс) под действием протеолитических ферментов. Хотя белок с весом 70 кДа чувствителен к различным протеиназам, включая трипсин и пепсин, наиболее воспроизводимые результаты дает обработка папаином: этот фермент расщепляет почти 100% антигенсвязывающего 70 кДа белка на две субъединицы с молекулярной массой 45 и 24 кДа. Обе субъединицы оказались резистентными к дальнейшему протеолизу и в сумме по массе составляли 70—85% продуктов протеолиза 70 кДа белка. Для обоих продуктов протеолиза была определена их биологическая активность. Субъединица с молекулярной массой 45 кДа сохраняла супрессорную активность, но не связывалась с антигеном; пептид с массой 24 кДа специфично свя-зывался с антигеном, но не обладал супрессорными свойствами.

Замечательно, что связывание нативного белка 70 кДа с антигеном само приводит к расщепленто и образованию тех же субъединиц 45 и 24 кДа. Они обладают теми же биологическими активностями, что и пептиды, образующиеся после ферментативного протеолиза исходной молекулы. Субъединицы с весом 45 и 24 кДа можно различить серологически. Антитела, полученные против миеломных белков и узнающие Ун-последовательность иммуноглобулинов, реагируют с исходной 70 кДа молекулой, а также с ее субъединицей 24 кДа, но не реагируют с 45 кДа субъединицей. Кроличьи антитела, реагирующие с некоторыми другими 70 кДа молекулами Тс, обладающими различной антигенной специфичностью, связываются с 45 кДа субъединицей, но не реагируют с 24 кДа субъединицей Тс.

Таким образом, биологическая активность исходной молекулы определяется суммой активностей 45 кДа и 24 кДа пептидов. Эти два пептида представляют собой, видимо, два различных домена белка Тс.

Свойства двух различных доменов Т-супрессорных молекул

  Молекулярная масса иэт Связывание с антигеном Супрессия Серологические детерминанты
специ-фическая неспеци-фическая СФ VH(Ig)
Очищенные Тс
Пептид А
Пептид В
70 000
45 000
24 000
5,0
5,6
?
+ +
-
+
+ +
-
-
-
+
-
+
+
-
+
-
+

В принципе возможно, хотя и очень маловероятно, что 24 кДа пептид представляет собой продукт деградации 45 кДа пептида. Для окончательного доказательства того, что эти пептиды соответствуют независимым доменам исходной 70 кДа молекулы, необходимо определить аминокислотную последовательность и проанализировать мРНК, кодирующую 70 кДа белок.